本公司在今年上半年攜帶中藥標(biāo)本、生物切片系列參加由中國管理科學(xué)研究院、中國名優(yōu)精品選購指導(dǎo)委員會、中國行業(yè)領(lǐng)先品牌企業(yè)推介活動當(dāng)中榮獲中國高新技術(shù)企業(yè)的榮譽稱號,我們會繼續(xù)努力把產(chǎn)品做得更好。[更多]
2016秋季第48屆全國高教儀器設(shè)備展已經(jīng)于10月19日在成都世紀(jì)新城國際會展中心開幕了,為期3天,本公司展位2G32號,河南奧星教學(xué)儀器有限公司歡迎各位光臨指導(dǎo)![更多]
昆蟲針的使用方法(一)一般是將昆蟲針直刺入蟲體胸部的中央。為保證分類上的重要特征不被損傷,并使同一大類標(biāo)本制作規(guī)格化,針叉甲蟲時要避開胸部腹面的胸足基節(jié)窩,將針穿刺在右翅鞘的內(nèi)前方,使針正好穿過右冊中足和后足之間。蝽科等半翅目昆蟲,蟲針應(yīng)穿插在小盾片略偏右方,這不但保護了小盾片的完整,也不會損壞胸部腹面的喙及喙槽。直翅目的昆蟲,如蝗蟲等,要將昆蟲針插到前胸背板的后方,背中線偏右側(cè),這樣不會破壞前胸背板及腹板上分類特征的完整性。膜翅目(蜜蜂螞蟻等)及鱗翅目(蝴蝶、蛾類)昆蟲,是從中央插入,通過中足基節(jié)的中間穿出。 短針(二重針)的使用方法,是在一根長針上插上用硬白紙或透明膠片作成的長7.65毫米、寬1.8毫米的小三角紙(或一段長10毫米的火柴棍),再將00號短針刺在三角紙或火柴棍上(針尖向上),最后將昆蟲標(biāo)本插在短針上。這種方法是專門為制作微小昆蟲設(shè)計的。制作微小不需要展翅的昆蟲標(biāo)本還有一種方法,是把特制的小三角紙插在昆蟲針上,然后在尖端粘上透明膠液,將蟲體的右側(cè)面粘在上面。二浸制昆蟲標(biāo)本的制作方法 浸制昆蟲標(biāo)本保存的大部分是無翅亞綱中的原尾目、彈尾目、雙尾目、纓尾目,以及蜻蜓目、蜉蝣目等等生活在水中的稚蟲和完全變態(tài)昆蟲的卵、幼蟲、蛹等。為使蟲體經(jīng)浸泡后不致變形,采到后比較大的蟲體首先要用開水去煮一下。煮的時間要看蟲體的大小、老嫩以及種類而定,一般煮至蟲體伸直稍硬即可。蟲體較大皮膚厚的幼蟲,煮5-10分鐘才行,小的柔軟的2-3分鐘就夠了。未經(jīng)煮過的幼蟲浸在保存液中,往往要收縮改變大小和形狀,甚至使蟲體變黑。因此,浸泡昆蟲的幼期及其它必要標(biāo)本時,這個步驟是不可缺少的。如果條件有限,也可以使用開水熱浴的方法,具體情況和泡方便面類似^0^ 經(jīng)過水煮或熱浴的標(biāo)本,立即投入保存液中保存。但較大的蟲體或體內(nèi)含水過多的種類,經(jīng)過一段時間,要換液幾次,才能長久保存,不然會因帶入保存液的水分過多而使標(biāo)本腐爛或污染。三展示標(biāo)本的制作方法 供展覽用的昆蟲標(biāo)本,主要用于普及昆蟲知識、教學(xué)及參觀等使用。制作方法是將昆蟲的標(biāo)本,按照一生的發(fā)育次序,如卵、幼蟲的不同齡、蛹、成蟲等,藝術(shù)的安排在展覽標(biāo)本盒里。同時要將相關(guān)材料也放入盒中:被害植物的葉片、天敵、防治或利用的照片等等。使觀眾通過一盒展覽標(biāo)本就能了解一種昆蟲一生的概貌,以及和環(huán)境、天敵的關(guān)系。制作展覽盒中的成蟲標(biāo)本時,需要展翅的種類,則不需要用昆蟲針刺穿固定。而是將標(biāo)本背面向下,平放在整姿臺上,用真尖釘住胸部展翅整姿。干燥后將蟲針拔下來,貼在展覽盒適當(dāng)?shù)奈恢?。幼蟲、卵、蛹可以用吹脹法制作,也可以用浸制標(biāo)本,不過要將之密封好。浸制標(biāo)本制作方法特別之處如下:先將標(biāo)本放入質(zhì)地好的玻璃瓶中,在標(biāo)本下襯托上棉花或各種顏色的泡沫塑料,使蟲體不能在玻璃瓶中滾動然后用酒精噴燈或氧化噴火嘴,將玻璃開口的一端燒軟,用鑷子拉成極小的細(xì)口,用注射器將保存液注入,再用火燒軟細(xì)口使其愈合。按照需要固定在展覽盒中適當(dāng)?shù)奈恢谩?nbsp;也可以用玻璃裝標(biāo)本法,與展覽盒相似,但不用棉花,在標(biāo)本上下都用玻璃,由于篇幅問題不作介紹,如果需要,請與本站聯(lián)系。四有機玻璃包埋昆蟲標(biāo)本的方法 采用甲基丙烯酸甲酯(俗名有機玻璃),把昆蟲標(biāo)本包埋起來,作成一種類似人造琥珀的昆蟲標(biāo)本。優(yōu)點是不怕蟲蛀,不生酶和避免損壞的優(yōu)點,由于透明度強,便于觀察,作為展覽、教學(xué)材料尤為適宜。材料及工具:制作有機玻璃包埋的原材料,是從化工原料商店買來的生、熟單體。⑴生單體,是未經(jīng)過聚合的甲基丙烯酸甲酯,為無色透明的液體,在包埋標(biāo)本時起溶劑的作用。⑵熟單體,是經(jīng)過聚合的甲基丙烯酸甲酯,為無色透明的粘稠狀液體,只有在5攝氏度的低溫下才能保持原來的性狀,在高溫下即聚合硬化。因此,生、熟單體應(yīng)盛于大型玻璃塞廣口瓶中,放在冰箱中保存;為應(yīng)用時方便和避免處置不當(dāng)浪費的材料,可用兩個50毫升的小廣口瓶,倒取部分單體以便隨時應(yīng)用。 準(zhǔn)備包埋的昆蟲標(biāo)本:最好選擇肢體完整,色澤鮮艷,外表皮比較堅硬些的如鞘翅目、直翅目、半翅目、膜翅目等以及鱗翅目的成蟲,較大昆蟲的內(nèi)部器官及各種昆蟲的幼體也可用來包埋,只是由于含水量多,需要的手續(xù)比較復(fù)雜。無論包埋哪種昆蟲,都要事先做好整姿及清潔工作,以便提高清晰美觀度。制模:用具是玻璃板(墊底)和載玻片(圍邊)。制模取決于包埋標(biāo)本的有機玻璃外部形狀:方形、長方形、菱形(如果制作成圓形,也可選用質(zhì)量較好的不同大小的平底玻璃皿,作為模具)。決定好模具的形狀后,先將所需的玻璃模具擦洗干凈,而且要反復(fù)檢查,表面已經(jīng)有傷痕或起毛的便不能用,以避免脫模時發(fā)生困難或制作出來的標(biāo)本埋塊表面不平整。制模時,先在玻璃板下墊一塊方格紙,以便用載玻片圍出另人滿意的形狀。然后用鑷子蘸少許熟單體滴在載玻片的接縫處的上方使其沿切縫外方自行下流將縫粘合,這樣的粘合處理方法要經(jīng)過兩次進(jìn)行。隨后放置在40攝氏度的溫箱中約半小時,使熟單體聚合硬化。模具制好后,即可注入4-5毫米的熟單體(不能過厚,以免接縫處的黏著部溶解,如有氣泡用解剖針將其刺破)。在放入40攝氏度溫香中12小時使其聚合硬化,作為固定層。如是注入幾次,使硬化后的單體厚度不少于3毫米。為了標(biāo)記所包埋昆蟲的名稱,在第二次注入熟單體前,將在生單體中浸泡過的,用繪圖墨水清晰書寫的標(biāo)簽放入,使其溶于熟單體中。擺放的姿勢因情況而定。包埋:先將經(jīng)過整資的干燥昆蟲標(biāo)本,浸在生單體中約一小時,使蟲體完全浸透。這時便在預(yù)先制好的模具中注入熟單體,但這一次的量決不能超過蟲體厚度的一半,以免放入標(biāo)本后蟲體漂移位置。然后從生單體中取出標(biāo)本,使蟲體背面向下,放在模具中的熟單體上。用鑷子或解剖針調(diào)整標(biāo)本的位置,待穩(wěn)定后,移到有玻璃蓋的盒中,避免灰塵以便日后觀察。這樣聚合雖然時間較長,但不易產(chǎn)生氣泡。2日后用解剖針試探,當(dāng)熟單體已聚合成半固體狀態(tài)尚未完全硬化之前,便可再加入5毫米的熟單體。以后每隔1-2日按上述方法檢查再加入熟單體。但以后的注入最好從模具的一端注入,以免不規(guī)則的注入相互擠壓產(chǎn)生不易排出的氣體。脫模整形:脫模后,可用剪刀、鋼挫、磨石等修整,尤其是最后聚合的部分。修整后,有些部分會失去光澤,可用布*拋光機進(jìn)行拋光。昆蟲標(biāo)本上的標(biāo)簽,是一個標(biāo)本上最原始的記錄,相當(dāng)于單頁戶口本。制作好的標(biāo)本要及時插上標(biāo)簽。 ================ 返回初做好的標(biāo)本,就要立即插上兩個標(biāo)簽(有1.5厘米長1.0厘米寬的黑框):上面一個標(biāo)簽寫有采集地點,海拔高度,采集時間;下面一個寫上寄主或采集方法、環(huán)境,采集人姓名。經(jīng)過研究查對已經(jīng)有學(xué)名的和經(jīng)過系統(tǒng)研究起出中文名字的昆蟲標(biāo)本,下面要再加上寫有中名、學(xué)名及鑒定人姓名的第三個標(biāo)簽。經(jīng)過研究,前人還未發(fā)現(xiàn)的新種,在標(biāo)本下還要加上新種或新亞種標(biāo)簽。 新種標(biāo)簽用三種不同的顏色來代表等級,在新種標(biāo)本中選取最典型的一個,定為正模標(biāo)本,下面用紅色標(biāo)簽;在選與正模標(biāo)本完全相同但性別不同的一個,作為配模標(biāo)本,用蘭色標(biāo)簽;其余的,作為副模,標(biāo)簽應(yīng)該是黃色的。標(biāo)簽要用繪圖墨水寫清楚,防止日久褪色或不易識別。浸泡在標(biāo)本瓶中的更要小心。[更多]
一、 準(zhǔn)備 采集前應(yīng)先收集有關(guān)采集地的自然環(huán)境及社會狀況方面的資料,以便周密安排采集工作。同時應(yīng)準(zhǔn)備采集必需的用品,主要有:標(biāo)本夾(45×30cm方格板2塊,配以繩帶)、標(biāo)本紙(吸水性強的草紙,折成略小于標(biāo)本夾的3~5張一疊若干)、采集袋(塑料袋)、枝剪、標(biāo)簽、野外記錄紙、照相機、海拔儀、羅盤、望遠(yuǎn)鏡、地形圖等。采集方法及要求按植物類別加以分述。二、種子植物標(biāo)本的采集和制作 (一)采集標(biāo)本的要求 1.標(biāo)本單株選擇 從同種眾多單株中,應(yīng)選擇生長正常,無病蟲害,具該種典型特征的植株作為采集對象。力求有花有果(裸子植物有球花、球果)及種子。 草本植物要挖出根,植株高的可以反復(fù)折疊或取代表性的上、中、下3段。一次采不全,應(yīng)記下目標(biāo),以備下次再采。 如果是供教學(xué)、科研用的標(biāo)本就要精細(xì)一些了。即使是同一種植物,也要考慮不同的環(huán)境下產(chǎn)生的不同的個體。比如說同一種植物會有的異性葉(比如構(gòu)樹就有缺刻狀分裂的和心狀卵形的兩種不同形態(tài)的葉片)、雌雄異株等等都要做成不同的標(biāo)本以便于教學(xué)示范。2.采集步驟 按預(yù)定目標(biāo),選擇合要求的單株,剪取具代表性枝條25~30cm(中部偏上枝條為宜),依次完成下列步驟: ?。?)初步修整。如去掉部分枝、葉,留下分枝及葉柄一部分。 ?。?)掛上標(biāo)簽,填上編號等(一律用鉛筆。下同)。標(biāo)準(zhǔn)的采集簽應(yīng)包括采集號 采集時間、年 月 日、采集者、采集地點。 (3)填寫野外記錄。注意與標(biāo)簽編號一致,標(biāo)準(zhǔn)的野外記錄應(yīng)包括采集號 采集時間、年 月 日、采集者、采集地點、海拔高度、樹高、胸高直徑、樹皮、樹枝葉、花、果、習(xí)性、生態(tài)環(huán)境、用途、俗名、正名、學(xué)名、科名、備考。當(dāng)然實際操作也未必要填這么多的,可以根據(jù)情況酌情填寫。 ?。?)暫放塑料采集袋中,待到一定量時,集中壓于標(biāo)本夾中。 ?。?)采集中應(yīng)注意同株至少采兩份,用相同的采集號標(biāo)記。如有的植物需要開花結(jié)果后再采,應(yīng)記下所選單株座標(biāo)方位,留以標(biāo)記。同種不同地點的植物應(yīng)另行編號。散落物(葉、種子、苞片等)裝另備小紙袋中,并與所屬枝條同號記載,影像記錄與枝條所屬單株同號記載。有些不便壓在標(biāo)本夾中的肉質(zhì)葉、大型果、樹皮等可另放,但注意均應(yīng)掛簽,編號與枝相同。 ?。?)注意有毒性、易過敏種類。如蝎子草、漆樹等,應(yīng)慎重。大戟科、毛艮科等等都是比較有名的毒科。當(dāng)然,在野外也不要亂嘗試沒吃過的植物。 ?。?)注意愛護資源,尤其是稀有種類。這個不用多說了吧,破壞環(huán)境和資源可不好。(二)臘葉標(biāo)本的壓制與裝幀 壓制是標(biāo)本在短時間內(nèi)脫水干燥,使其形態(tài)與顏色得以固定。標(biāo)本制作是將壓制好的標(biāo)本裝訂在臺紙上,即為長期保存的臘葉標(biāo)本。壓制與制作標(biāo)本須注意以下各點: 1.順其自然,稍加擺布,使標(biāo)本各部,尤其是葉的正背面均有展現(xiàn)。可以再度取舍修整,但要注意保持其特征。 2.葉易脫落的種,先以少量食鹽沸水浸0.5~1分鐘,再以75% 酒精浸泡,待稍風(fēng)干后再壓。 3.及時更換吸水紙。采集當(dāng)天應(yīng)換干紙2次,以后視情況可以相應(yīng)減少。換紙后放置通風(fēng)、透光、溫暖處。捆綁標(biāo)本夾時,松緊要適度,過緊易變黑,過松不易干。標(biāo)本間夾紙以平整為準(zhǔn)。如球果、枝刺處可多夾些。換下的潮濕紙及時晾干或烘干,備用。 標(biāo)本壓制干燥后即可裝訂,裝訂前應(yīng)消毒和做最后定形修整,然后縫合在臺紙上(30~40cm重磅白版紙)。將野外記錄貼左上方,定名簽填好貼右下角,此簽不得隨意改動。對定名簽鑒定的名稱有異議,可另附臨時定名簽。照片、散落物小袋等貼在另角。貼時均不要用漿糊,以防霉變。標(biāo)本布局應(yīng)注意勻稱均衡、自然。裝訂后的標(biāo)本再經(jīng)過消毒,夾紙或裝入塑料袋保存于專門的標(biāo)本柜中。 縫合的時候一般取一些莖或枝,用線固定在白版紙上,葉子就要粘貼了(我們是用毛筆蘸白膠涂在葉子背面粘貼)。原則是葉片之間盡量不重合。談?wù)劚救说慕?jīng)驗,粘羽狀復(fù)葉的時候建議從上往下粘,因為可以保證葉片不重合,如從下往上很可能貼到中段兩片葉子的角度就近乎0度了,再下去就要重合了。當(dāng)然,我們博物組比較講究標(biāo)本的美觀,所以在裝訂和整形上還是比較注意植株在白版紙上排一個怎樣的形狀比較好看。(三)其它標(biāo)本處理 有些不易上臺紙裝幀成臘葉標(biāo)本的種類或器官,可參照下列方法處 1.常綠、針葉帶球果標(biāo)本,如云杉、油松等,可待其干燥后托以棉花放入標(biāo)本盒中。 2.樹皮標(biāo)本可干燥后釘、貼于薄板上,存于塑料袋中。 3.不宜壓制的果實、花及含水高的枝葉,可制成液浸標(biāo)本。程序為:清洗標(biāo)本,縛于玻璃棒(條)上;放入藥液標(biāo)本缸中,藥液應(yīng)浸沒標(biāo)本;蠟封瓶蓋;貼上標(biāo)簽。三、 藥液配方主要有: (1)普通浸制 目的在防腐。70%酒精或5~10%甲醛水溶液。酒精浸制可以長期保存,但易脫色;甲醛水溶液價廉,也能保存一定顏色,但藥液易變黃。大的果實應(yīng)切開,以達(dá)徹底防腐目的。溶液濃度試定。 ?。?)保存綠色浸制法 醋酸銅粉末加入50% 冰醋酸中,漸至飽和。將飽和液加清水1∶4稀釋,加熱至85℃,放入標(biāo)本,少時標(biāo)本變黃綠色或褐色,繼而轉(zhuǎn)綠,重現(xiàn)原有色澤。約10~30分鐘后,將標(biāo)本取出,用水清洗,放入50% 甲醛水溶液保存。 ?。?)保存紅色浸制法 先放1% 甲醛、0.08% 硼酸中浸1~3天,標(biāo)本由紅轉(zhuǎn)褐,取出清水洗凈,置入1~2% 亞硫酸、0.2% 硼酸溶液中即可,如仍發(fā)綠,可加少量硫酸銅。 ?。?)保存黃色、綠色浸制法 亞硫酸、95% 酒精各568ml,加水 4500ml,混合過濾使用。 ?。?)硫酸鎂保鮮法 以硫酸鎂不同濃度,依次由低到高濃度過渡,適于各種顏色保鮮。 ——以上摘自《植物形態(tài)術(shù)語及標(biāo)本采集制作》 看起來有點教條哦,自己操作就可以比較靈活了。主要的步驟其實就是修整、壓制、上臺裝幀。做好上面三步,就可以獲得一個自制的植物標(biāo)本了,個人覺得烏斂梅做出來比較好看。葉片大小形狀都比較簡單美觀,有小家庭的也可以選幾個不同的野花野草做成標(biāo)本作為居家裝飾用。[更多]
石蠟切片法的基本過程是,先將已經(jīng)固定的送檢組織經(jīng)沖洗、脫水(用遞升濃度的乙醇等)、透明(用二甲苯等)、浸蠟(用石蠟),然后用石蠟將組織包埋成蠟塊,再經(jīng)切片機切片和染色而制成切片。石蠟切片全過程一般需要24h。利用全自動脫水機及包埋機可實現(xiàn)石蠟切片的程序化,自動化操作,大大提高了制片效率。石蠟快速切片診斷一般30min左右制好切片并發(fā)出報告。但這種方法的切片質(zhì)量還不如上常規(guī)切片那樣理想,故通常只在必要時方予采用。[更多]
1 . 取材 取材的好壞,直接影響切片的質(zhì)量。醫(yī)生在取材時,首先要有一把鋒利的取材刀,在切割組織時要避免取材刀來回拖拉,切取的組織塊厚薄要均勻,一般厚度以0.2 ~0.3cm 為適,較容易發(fā)脆的組織如甲狀腺、肝臟、血塊、淋巴結(jié)、大塊癌組織等可適當(dāng)厚一點,而脂肪組織、肺組織、纖維性腫瘤、平滑肌瘤等致密的或試劑不易滲入的組織應(yīng)取薄一些;淋巴結(jié)應(yīng)修掉兩側(cè)球冠,并盡量剔除周圍的脂肪組織。在取材中還應(yīng)十分注意組織內(nèi)是否有縫線或骨組織,如碰到不可避免的鈣化組織,應(yīng)與技術(shù)室講明,在切取纖維組織、肌肉組織、胃腸道時,應(yīng)注意纖維及肌肉的走向,取材時盡可能按與纖維平行走向切取為佳。 2 . 固定 固定是技術(shù)室工作的第一步,也是在整個制片過程中無法補救的一步。所謂“固定”,就是組織離體后,用各種辦法使其細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)盡量接近其生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程。固定的目的是為了防止組織細(xì)胞自溶與腐敗,防止了細(xì)胞內(nèi)的酶對蛋白質(zhì)的分解作用,使細(xì)胞內(nèi)的各種成分如蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物或酶類轉(zhuǎn)變?yōu)椴蝗苄晕镔|(zhì),以保持原有的結(jié)構(gòu)與生活時相仿。另外,組織固定后,均呈一定的硬化狀態(tài),增加組織韌性,而且不易變形,有利于以后的組織處理。所以組織一旦離體必需及時固定,固定液的量應(yīng)為組織的5 倍。固定的關(guān)鍵主要與固定的及時性、固定液的選擇、固定液的濃度、固定的溫度和時間有關(guān)。最常用的固定液為10%福爾馬林。筆者認(rèn)為,10%福爾馬林由于受到福爾馬林的質(zhì)量、使用時的揮發(fā)和取材時帶入的水分影響,濃度被降低致組織固定不足,而高濃度的福爾馬林,降低了對組織的穿透性,形成周圍固定好而中央固定不到的現(xiàn)象。通過實踐,本人認(rèn)為以酸性12~15%的福爾馬林最佳。大標(biāo)本(2cm 厚)一般需要6~12個小時,小標(biāo)本一般需要3~6 個小時;當(dāng)室溫低18℃時,可在37℃以下的溫箱內(nèi)加溫4~6 個小時。由于HE 染色最佳著色PH為3.5~4.5, 中性福爾馬林對蘇木素染色有一定影響,細(xì)胞核容易發(fā)灰,核染色質(zhì)不佳。 所以, 盡管中性福爾馬林對抗原有很好的保存作用,但酸性福爾馬林對絕大多數(shù)抗原來說也有很好的保存作用,所以在沒有特別處理的情況下常規(guī)HE 用12~15%酸性福爾馬林也可以(每100毫升12~15%福爾馬林液內(nèi)加5毫升冰醋酸)。骨髓、結(jié)締組織固定以Bouin 液為佳,經(jīng)Bouin 液固定后的組織必須流水沖洗4 小時以上。有條件的單位可根據(jù)不同要求選用二種或二種以上的固定液;少數(shù)單位還可建立組織冷凍庫,以便適應(yīng)各種特殊的處理要求。 3. 水洗 固定后水洗(10~20 分鐘),通常被很多人所忽視,而水洗不徹底,容易造成脫片和染色不鮮艷。對需做免疫組織化學(xué)的組織,更不應(yīng)當(dāng)忽視。福爾馬林不利于組織塊內(nèi)抗原的保存。 4 . 脫水和透明 所謂脫水就是利用脫水劑將組織內(nèi)的水分置換出來,以利于有機溶劑的滲入,這一過程稱為脫水。脫水是否徹底,直接關(guān)系到組織是否能充分透明,而脫水過度(原因是組織在純酒精內(nèi)時間過久,發(fā)生組織質(zhì)地發(fā)生變化)容易造成組織發(fā)脆。造成組織發(fā)脆的原因還有加溫(溫度超過 35℃)、脫水劑內(nèi)加有丙酮、浸蠟用的石蠟中二甲苯過多等等。一般我們總認(rèn)為組織發(fā)脆跟高濃度酒精有關(guān),而忽視了與低濃度的酒精關(guān)系,其實低濃度的酒精具有強大的穿透力,比純酒精更容易滲透到組織塊內(nèi)部使之脫水,組織如果在低濃度酒精里充分脫水,在高濃度酒精里只需脫去從低濃度到高濃度之間的水份,因此,僅需短時間就可完成,如果這時不縮短純酒精的時間,便會引起組織發(fā)脆;如果脫水時加溫,使用丙酮,還可引起組織收縮,并影響免疫組織化學(xué)的標(biāo)記。為了使石蠟浸入到組織塊內(nèi),必須經(jīng)過一種既能與脫水劑混合,又能與石蠟相溶的媒介物質(zhì),這個過程稱透明。目前最好的透明劑是二甲苯。很多人認(rèn)為二甲苯極容易使組織發(fā)脆,這個觀點很片面,在常溫下,如果不是時間過長(超過24 小時以上)二甲苯并不會引起組織過份發(fā)脆,相反會使某些組織結(jié)構(gòu)比較質(zhì)韌的組織:比如子宮肌瘤等相當(dāng)好),但是當(dāng)二甲苯溫度超過 35℃以后,極易引起組織發(fā)脆。所以本人認(rèn)為,大小標(biāo)本最好分開脫水,一般情況下,大標(biāo)本脫水時間(室溫18℃)以80%酒精2 小時、95%酒精(2道)各1個半小時至2 小時、純酒精(3道)各1個半小時至2 小時,二甲苯(2道)各30-60 分鐘為宜;小標(biāo)本脫水時間應(yīng)相應(yīng)縮短。脫水時間長短,與室溫高低有密切的相關(guān)。我們在實踐中發(fā)現(xiàn),室溫在12~15℃時,可作為一個臨界溫度范圍。當(dāng)室溫高于此溫度范圍時,組織容易脫水,可適當(dāng)縮短脫水時間;而室溫低于該溫度范圍時,應(yīng)適當(dāng)延長脫水時間(如能保證在一個恒定的溫度下最佳)。更換試劑,應(yīng)以量為基礎(chǔ),定量更換,不能等到切片不好時再去更換。否則,至少會有2~3批組織切片不好。根據(jù)我科經(jīng)驗,如試劑用量為500ml,每500個蠟塊更換一次為宜。 5. 浸蠟 組織透明后,在熔化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱為浸蠟。用其他浸透劑(如火棉膠、明膠等)滲入組織內(nèi)部的過程可稱為浸透或透入。浸蠟溫度過高(超過 60℃),在蠟內(nèi)加入二甲苯蠟或由于透明時帶進(jìn)的二甲苯過多,都會導(dǎo)致組織發(fā)硬,還會使組織內(nèi)的抗原受到破壞;所以作者主張浸蠟用的石蠟熔點在56℃(三道),第一道:石蠟30 分鐘;第二道:石蠟90 分鐘;第三道:石蠟,90 分鐘。浸蠟溫度控制在56~58℃左右。(第一道也可用硬脂酸石蠟1:3混合浸蠟,不僅可軟化組織,特別適用于比較韌、硬的組織,而且由于硬脂酸是弱酸性的,對細(xì)胞核有媒染作用,核漿比鮮明,但容易脫片; 時對疏松組織容易散片)。有條件的可以每天打開第一道石蠟的蓋子,讓二甲苯揮發(fā)。浸蠟所用的石蠟如有雜質(zhì)盡可能過濾,以防附在組織上,造成切片刀刀口受損,或切片破碎和劃痕增多。 6. 包埋 用包埋劑來支持組織的過程稱包埋。最常用的是石蠟包埋法。包埋的關(guān)鍵一是平整,二是方位。要求在包埋時,應(yīng)采用鑷子輕壓組織塊拱起部份,使之平貼于底部,通常采用組織的最大面包埋。囊壁、管腔組織應(yīng)豎直包埋。小塊多顆組織,應(yīng)盡量放在一起,并保證在一個平面上。修去兩邊的余蠟 (所謂的兩邊,指切片時與切片刀垂直的兩側(cè))。包埋時還應(yīng)注意有無縫線,紙絮,如有一定要去除。胃黏膜活檢標(biāo)本,不能按一般的規(guī)律取最大包埋面,應(yīng)采取窄面豎起包埋。包埋的蠟更應(yīng)過濾,留有雜質(zhì)的石蠟,容易造成污染或刀口受損。蠟的熔點應(yīng)在56~58℃之間選擇,不提倡在冬天使用軟蠟。因為用軟蠟包埋的蠟塊,到了夏天,會粘在一起,不利于資料的保存,而且即使在冬天,用硬蠟包埋的蠟塊也比用軟蠟包埋的蠟塊要好切。 7. 磨刀 要想切好一張切片,首先要有一把鋒利的切片刀。磨刀是從事切片技術(shù)人員的一項最基本技術(shù),刀磨的好壞,直接關(guān)系到切片的質(zhì)量。磨刀的手法各人不同,但都要求用力均勻,使刀口和磨刀石全面接觸,兩手的用力點應(yīng)在刀口上,而不是在刀背上。切片刀應(yīng)用一次磨一次,每次僅需10~15分鐘,過長時間的磨刀,容易把已經(jīng)磨出的鋒刃磨掉,檢查切片刀是否鋒利,用手試摸刀口的方法并不十分科學(xué),不僅不能證明切片刀是否真正鋒利,而且容易損害刀口,最簡單的辦法是每次磨好后拿一個蠟塊試切一下。每次磨好刀后,應(yīng)將磨刀石用蓋子蓋好,以防灰塵掉在磨刀石上,用有灰的磨刀石磨刀,會使切片刀產(chǎn)生許多細(xì)小的缺口?,F(xiàn)在很多單位都買了磨刀機,磨刀機用來開刀鋒和磨缺口的確不錯,但由于磨刀的角度和時間不易精確掌握,故效果并不理想。根據(jù)我們的經(jīng)驗,真正的鋒刃很難用機器磨出來。一次性刀片在很大程度上解決了這個問題。如用一次性刀片,必須及時更換刀口。一個刀口切小標(biāo)本不應(yīng)超過20~25 只蠟塊,切大標(biāo)本不應(yīng)超過10~15只蠟塊。8. 切片 切片的第一步必需粗切。粗切的厚度大約在50~100微米左右,質(zhì)地較硬的組織或較小的組織應(yīng)再薄一些,粗切致組織全部暴露后,才進(jìn)行細(xì)切。細(xì)切至組織塊表面均勻一致,無白點后,再把切的蠟片放入溫水中。切片時要求用力均勻、柔和,搖速不易過快或過慢。過快會導(dǎo)致切片厚薄不均,機器磨損;過慢會使切片增厚。切片厚度一般為3~5微米。切片的要求是完整、薄、均勻。切下的片膜其大小形狀應(yīng)與組織塊一致,切片的不完整,常會將重要病變遺漏,導(dǎo)致誤診、漏診。在切片放蠟塊時,應(yīng)注意組織包埋的方向,組織的層次,纖維、肌肉等的走向應(yīng)與切片刀平行,較難切的部分應(yīng)放 在上面,如皮膚的表皮,腫塊的包膜,胃腸道的漿膜等,這樣可以減少組織的斷裂現(xiàn)象。操作切片機時應(yīng)用力均勻,避免用力過重。對脫鈣組織、骨髓,以及已知的鈣化組織,應(yīng)選用固定的刀口,以減少其他部位出現(xiàn)缺口的可能性。在使用毛筆展片時要防止筆絲進(jìn)入刀口,因為每切到一根筆絲,就會增加一個缺口。切片厚度一般為4~6微米,有人認(rèn)為:只要切片機刻度標(biāo)著幾個微米,切出來的片子就是幾個微米。其實不然,當(dāng)切片刀不鋒利,或切片時速度不勻,或切的較慢時,切的片子都會變厚,只有在切片刀十分鋒利、切片勻速的情況下,才能真正保證其厚度。下面是切片時碰到的問題的原因及可能處理的方法:(1)組織發(fā)脆:一般是脫水、透明、浸蠟時間過長、溫度過高,并與組織本身質(zhì)地也有關(guān),在切片時,邊切邊用嘴向蠟片吹氣,可能會好些。(2)切片卷起,可能是刀不鋒利,或刀鋒在另一面,或刀角度過大,切片太厚等等。(3)蠟片彎曲:可能是刀鋒不均,切片刀未磨直,切片刀與蠟塊不平行。(4) 透明、浸蠟時間過長、溫度過高,并與組織本身質(zhì)地也有關(guān)(5)厚薄不均:可能是刀、刀座及蠟塊未夾緊,組織太硬,或切片機主軸太向前,或切片機已磨損。(6)切片出現(xiàn)裂痕:可能是刀有缺口,石蠟內(nèi)有雜質(zhì),組織內(nèi)有鈣化、骨片或有線結(jié), 也可能會有棉紙纖維等。(7)切片不連片,切不下片,切片很厚,或者切片后蠟塊發(fā)白,內(nèi)陷:組織脫水不佳。補救辦法:可先將蠟塊溶解,取出組織,放入加熱水浴的丙酮內(nèi)(80℃),30~60 分鐘,再進(jìn)行透明浸蠟包埋切片,也許會好一點。 9. 展片與撈片 展片水溫應(yīng)在42℃至47℃之間,這主要和包埋蠟的熔點有關(guān),水溫過高,會引起組織細(xì)胞散開水溫過低,切片皺摺無法攤平。包埋蠟中如有二甲苯,也會造成石蠟溶解現(xiàn)象。而用一次性刀片切的片子,一碰到熱水,片子上的皺摺就無法再展開,這有二個方法可以解決:第一、可以在切片時邊切邊向蠟片吹氣,這樣的片子就會非常平整,放到熱水里就會自然展開,比較方便快捷,但這樣的片子會略微厚一點;第二、在切完片子后,先把切片放在 30%酒精水溶液中,讓酒精的張力自動把皺摺展開,然后再將切片移到熱水,這樣的片子會較薄;如酒精濃度過高,容易引起切片破碎,出現(xiàn)裂隙,像脂肪之類細(xì)胞間粘附性較小的組織一碰到酒精就會散開,故不能用此法。最后撈片時玻片要干凈,要選擇那些完整、無皺摺的切片,粘貼于玻片中1/3和下1/3 的中間。 10. 烤片和脫蠟 烤片,一般在60℃的溫箱內(nèi)烤片0.5~1小時左右,溫度過高,會引起切片細(xì)胞收縮;時間太短(少于20 分鐘),容易造成脫片。脫蠟也相當(dāng)重要,如果脫蠟不干凈,切片不易著色或著色不勻,所以脫蠟用的二甲苯要經(jīng)常更換,一般用3道二甲苯,每500ml 液體,處理500 張切片后更換一次為宜。當(dāng)室溫低于18℃時,必須將切片從溫箱拿出后立即放入二甲苯中脫蠟,或?qū)⒍妆椒湃霚叵鋬?nèi)預(yù)熱(37℃左右)脫蠟,最高不得超過60℃。然后經(jīng)高濃度的酒精到低濃度的酒精洗去二甲苯,至水。 11. 染色 蘇木素染色時間要根據(jù)染料的新舊、溫度、切片的類型而定,一般為5-15分鐘。經(jīng)水略洗后,用鹽酸酒精分化,分化程度必須用顯微鏡控制。分化水洗后,可用溫水或自來水藍(lán)化,并充分水洗 (流水沖洗5分鐘以上),以防鹽酸殘留導(dǎo)致切片褪色。我們不提倡使用堿性溶液(釋氨水、肥皂水等)促藍(lán),盡管藍(lán)化效果很好,但從實踐的結(jié)果來看,用堿性溶液促藍(lán)的切片不能長期保存,容易褪色。最后入伊紅復(fù)染(5-20秒)。HE 染色的關(guān)鍵在于深淺適度,對比鮮明,一般有經(jīng)驗的,肉眼就能判斷,但偶而也會出現(xiàn)失誤,所以用顯微鏡控制是最保險的方法。其關(guān)鍵的步驟在于蘇木素染好后的分化及藍(lán)化過程,在藍(lán)化結(jié)束后,應(yīng)在顯微鏡下觀察細(xì)胞核著色是否合適,核結(jié)構(gòu)是否清晰,胞漿內(nèi)是否有殘留的蘇木素等等。染色理想的切片在顯微鏡下應(yīng)是:細(xì)胞核與細(xì)胞漿應(yīng)藍(lán)紅相映,鮮艷美麗;核漿對比明顯,核膜及核染色質(zhì)顆粒清晰可見。 12. 脫水和封片 切片脫水應(yīng)從低濃度的酒精到高濃度的酒精,80%酒精1 道,95%酒精2 道,純酒精2 道,(正丁醇1道),二甲苯2道。濃度低的酒精比濃度高的酒精更容易脫水,但也容易使伊紅退色,故脫水時間可短一點,每道3-5 分鐘,純酒精每道10分鐘。為增加酒精與二甲苯的相融性,可在二甲苯前面增加一道正丁醇;石碳酸-二甲苯液也有此效,但用石碳酸時如不洗凈,可引起切片退色,不利于切片久存,故不作推薦。切片經(jīng)二甲苯透明后,用中性樹膠封固。為增加切片的透明度,防止細(xì)胞收縮、龜裂或切片出現(xiàn)黑色結(jié)晶樣小點。所以我們規(guī)定切片必須濕封,不得用溫箱烤干或電吹風(fēng)吹干后干燥封片。在南方冬春、霉雨季節(jié),封片時要防止口鼻呼出的氣體接觸到切片;在天氣較潮濕的日子里,不宜一次將多張切片取出待封,以免切片“還潮”,形成透明不佳,出現(xiàn)云霧狀水珠。脫水劑的更換也應(yīng)有一定的時間規(guī)定。一般是每500ml 液體,處理500 張切片后更換一次為宜。封片樹膠不能過稀,封片時樹膠要均勻充滿蓋玻片且樹膠不及外溢為佳。要將組織全部覆蓋,也不能有氣泡。最后,粘貼標(biāo)簽標(biāo)簽必須貼于玻片左側(cè),編號書寫清楚,最好能打印。[更多]
生物切片標(biāo)本制作有許多不同的方法,一般可分為非切片法與切片法兩大類:非切片法有涂片、鋪片、壓片、磨片、整裝片等;切片法又包括石蠟切片法、火棉膠切片法、冰凍切片法等。一、制作器械1、器械電熱溫箱:體積較小,溫度調(diào)節(jié)一般在60-75℃顯微鏡:用于觀察染色情況,及檢查切片效果切片機:切片用,通常為了能夠得到連續(xù)切片,多用轉(zhuǎn)動切片機切片刀:為切片機必備配件磨刀機:磨刀用電熱溫臺:為了展平蠟帶或烤干制片 天平:配溶液用玻璃器皿:染色缸、燒杯、量桶、試劑瓶、滴液管等 其它:剪子、鑷子、解剖針、毛筆、刀片、小木塊等二、常用試劑1 常用固定劑包音氏固定液:由苦味酸飽和水溶液75毫升、甲醛(40%)25毫升、冰醋酸5毫升配制。該固定液適用于無脊柱動物,其滲透力強,組織收縮小,不易變形。海利氏液:由重鉻酸鉀2.5克、氯化汞6克、蒸餾水100毫升、40%甲醛液5毫升配制。該液適用于骨髓,脾,肝等適血器官的固定。 卡諾固定液:由純酒精15毫升、冰醋酸5毫升配制。該液滲透迅速,可用作植物組織或細(xì)胞的固定,亦適用于動物組織,但不易時間太長,防止組織過度硬化。約翰森固定液:由福爾馬林5毫升、丙酸5毫升、50% 酒精90毫升配制。該液用于固定植物根尖、莖尖,有較好的效果,通常固定24小時,也可做保存液。2 常用脫水劑酒精、正丁醇、叔丁醇、丙酮等。3 常用透明劑二甲苯、甲苯、氯仿、丁香油等。4 常用粘貼劑明膠粘貼劑:明膠1克、蒸餾水100毫升、石炭酸2克、甘油15毫升蛋白粘貼劑:新鮮蛋白25毫升、甘油25毫升、石炭酸0.5克5 包埋劑石蠟、火棉膠、明膠等6 封固劑阿拉伯樹膠、加拿大樹膠7 常用染劑代氏染液:蘇木精4克、95%酒精25毫升、10%銨明礬水溶液400ml,瓶口用紗布封蓋,置向陽處,3-4天后加入甘油100毫升、甲醇100毫升,該液兩月后成熟,色彩藍(lán)紫色,時間越長效果越好,為生物制片技術(shù)中最常用的核染劑,染色后,一般用0.1% 鹽酸水溶液褪去染色,稱為分色。伊紅水溶液:0.1-1% 伊紅又稱曙紅,是酸性染料,一般與蘇木精共同使用,主要染細(xì)胞質(zhì)、膠原纖維及肌纖維。番紅-固綠對染:固綠染液由0.5%的95%酒精溶液配制,番紅染液由1%的50%酒精溶液。制備植物石蠟切片常用固綠--番紅對染,結(jié)果是木質(zhì)化的細(xì)胞壁及細(xì)胞核染成紅色,薄而且纖維素的細(xì)胞壁和胞質(zhì)染成綠色。蘇丹ш染液:蘇丹ш 0.3-0.5克、70%酒精100毫升,此染液主要用于染淀粉粒。三、實驗步驟一、基礎(chǔ)方法二、以石蠟切片為例,介紹生物切片制作方法一、基礎(chǔ)方法1 、非切片法即不用切片機,不經(jīng)切片手續(xù)而制成切片的方法,根據(jù)材料性質(zhì)的不同,有不同的處理方法,該類方法操作簡單快捷,其中鋪片法、封藏法可使原有組織結(jié)構(gòu)不被破壞,涂片法、壓片法彌補了用包埋、切片法所不可能觀察清楚的不足,因此是顯微標(biāo)本制作的中常用的手段。1 涂片法主要用于血液、精液、尿液、痰液、微生物等不能切片成薄片的液態(tài)顆粒性材料,可在載玻片上涂成單層細(xì)胞,再經(jīng)固定,脫水,染色等手段制成永久標(biāo)本。2 鋪片法主要用于動、植物組織的表皮層觀察,可活體取待觀察動、植物組織,用尖鑷子撕去一層表皮,迅速平鋪在載玻片上。 如洋蔥表皮細(xì)胞的鋪片制備。3 壓片法一些較幼嫩,柔軟的材料可將其置載玻片上,用小解剖刀將其分散,加染料一滴,再蓋上蓋玻片,用拇指垂直用力擠壓,使組織散成一薄片,再進(jìn)行觀察,如植物根尖觀察染色體,花粉粒觀察發(fā)育階段等。4 離析法該方法是利用化學(xué)試劑使組織的細(xì)胞間質(zhì)溶解,使細(xì)胞能分散成單個個體。經(jīng)染色、脫水、透明即可觀察其個體形態(tài),適用于肌肉、葉片、莖等部位。5 磨片用于很堅硬的組織,如骨和牙。2 、切片法切片法是必須依靠手或切片機將組織切成薄片來進(jìn)行觀察的方法。為了能清晰地觀察到動、植物的組織結(jié)構(gòu)及細(xì)胞形態(tài),必須先經(jīng)過一系列步驟將組織內(nèi)滲入某些支持物質(zhì),使組織變硬以利于切成薄片,根據(jù)所用支持劑的種類不同,可分為徒手切片法、石蠟切片法、火棉膠切法、冰凍切片法等類型,切成薄片后還需要去蠟,染色、脫水、透明等步驟,將其制成永久標(biāo)本。二、以石蠟切片為例,介紹生物切片制作方法1 取材根據(jù)不同的實驗?zāi)康?,選擇相應(yīng)的材料,材料要求新鮮、準(zhǔn)確、完整,材料要避免擠壓、挫傷、干枯。所采集材料應(yīng)立即放入固定劑,并編號,注明采集時間、地點、名稱、組織部位,所取組織塊要大小適當(dāng),即要能說明問題,又要考慮固定劑的穿透能力。一般組織學(xué)取材稍大,細(xì)胞學(xué)取材稍小,植物組織取材稍小,動物組織取材要稍大。1.1動物的麻醉和殺死從活的動物體上采取材料不象采集植物材料那么容易,因為在不施加麻醉的情況下,有的動物會收縮(如蚯蚓、水蛭),有的會騷動(如蛙、鼠),使我們無法下手。但制片所需的材料又要求越新鮮越好,尤其是細(xì)胞學(xué)方面的研究對材料的新鮮程度要求更嚴(yán)。因此,要割取生活著的動物組織,在一般情況下,就要對動物施行麻醉,然后再割取材料加以固定。但是所用的麻醉藥品,必須以不影響細(xì)胞結(jié)構(gòu)為原則。若是一般的組織學(xué)制片,要求不太嚴(yán)格的話則可將動物先殺死然后速取其組織進(jìn)行固定。蛙、蟾蜍、鼠等較小的動物,可用斷頭法殺死,即用普通剪刀剪斷頸部。較大的動物,如天竺鼠、免、貓等可用木槌猛擊頭后部,使其昏倒,或用50毫升的注射器從耳靜脈向心臟注入空氣,使動物發(fā)生急性空氣栓塞痙攣而死。上述動物若需麻醉后取材,則可用脫脂棉球蘸氯仿或乙醚、置于動物的鼻尖部,令其吸入麻醉。大動物(狗、猴等)應(yīng)用氨基甲酸乙酯作靜脈注射麻醉。劑量一般為每千克動物體重用1克。麻醉后的動物也需放血后進(jìn)行取材固定。昆蟲等小動物可投入充滿氯仿或乙醚蒸氣的大口瓶中,令其麻醉。若要殺死,可將其投入含氰化鉀的毒瓶中。1.2動物組織塊的切割割取動物組織塊時,需注意以下幾點:第一,要考慮所取的材料應(yīng)包括各臟器的重要結(jié)構(gòu)或全部結(jié)構(gòu),如消化管就應(yīng)包括粘膜、粘膜下層、肌層和外膜四層結(jié)構(gòu)。若所取的器官太大,不易全部制片時,則可切取能代表該器官的部分材料,如狗的腎臟,可切取包括皮質(zhì)、髓質(zhì)和腎盂的一部分為材料。 第二,應(yīng)注意切割方向。如在管狀器官(腸等)取材時,一般是取其橫切面制片,但要觀察小腸的環(huán)行皺壁時,就應(yīng)取其縱切面制片。 第三,組織塊必須切得小而薄。細(xì)胞學(xué)制片的組織塊不能超過2毫升,一般組織塊的大小以0.5×0.5×0.2cm為宜,柔軟組織不易切小,可先取稍大的組織塊固定2 - 3小時。等組織稍硬后再切成薄的小塊繼續(xù)固定。2固定動、植物的任何組織部位,要制成切片,首先用化學(xué)試劑將其固定,固定的作用在于通過固定劑,在盡量短的時間內(nèi)使原生質(zhì)體停止生命活動,并如同生前一樣精細(xì)的保存其細(xì)胞結(jié)構(gòu),同時易于后步驟的染色所以良好的固定劑應(yīng)該具備以下條件:迅速滲入組織殺死原生質(zhì)體,在短時間內(nèi),組織內(nèi)外完全固定;盡可能避免使組織膨脹或收縮,并且軟硬合適于切片;增加細(xì)胞內(nèi)含物的折光程度,易于鑒別,同時增加媒染作用和染色能力。固定液同時是防腐液,使材料不致變質(zhì)。3 脫水脫水是用一種即能與水又能與透明液混合的液體來逐漸置換樣品中游離的水?,F(xiàn)采用的脫水劑一般是丙酮或乙醇來進(jìn)行梯度脫水,脫水的時間,可根據(jù)組織的類型,大小而定。脫水的過程: 一般是30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇→80%→90%→100% →100%脫水應(yīng)逐步而不應(yīng)跨越太大的進(jìn)行,否則將引起組織強烈的收縮或變形,在經(jīng)無水乙醇處理時,應(yīng)保證試劑的純度。4 透明透明是用一種即能與酒精又能與包埋介質(zhì)混合的液體來置換樣品中的酒精,從而為最終的包埋創(chuàng)造一個有利的條件。 現(xiàn)采用的透明劑一般是二甲苯、甲苯、氯仿等。其過程為:1/3二甲苯+2/3乙醇混合液→1/2二甲苯+1/2乙醇混合液→2/3二甲苯+1/3乙醇混合液→二甲苯→二甲苯二甲苯是使用最廣泛的一種透明劑,它具有滲透力強,溶解石蠟量大,又易揮發(fā)的優(yōu)點,其缺點是易使組織收縮,變硬,變脆,因此透明時間應(yīng)根據(jù)組織塊大小及質(zhì)地酌情而定。5 滲蠟將完成透明步驟的組織塊浸入透明劑與石蠟混合液中,不斷提高石蠟的比例,直至用石蠟完全置換了組織塊中的透明劑,便于今后的包理與切片。 石蠟有液態(tài)與固態(tài)二種,滲蠟要在恒定溫箱(60°c)中進(jìn)行,以保證石蠟處于液態(tài)中。6 包理組織塊經(jīng)石蠟滲透后,其內(nèi)部間隙已完全被石蠟占據(jù),此時還需要用同種硬度的石蠟包理成蠟塊以利于后邊的切片,包理可用相同的器具,也可折疊一牛皮紙盒。將液態(tài)石蠟緩緩倒入紙盒中,再用鑷子輕輕將浸好蠟的組織塊夾入紙盒,淺埋在石蠟內(nèi),待石蠟冷卻成固態(tài)即包埋完畢。 至此,一塊組織已完成前處理過程,可以切片,前邊的步驟表明看來既無高深的理論,又無復(fù)雜的技術(shù),一切看似簡單,但一步做不到都會造成整個制片的前功盡棄。7 切片修塊:切片前需修整蠟塊,即將包埋好的一大塊蠟塊切開,使每一小塊都含有一塊組織,并將這組織周圍的石蠟切除,將組織修成一小塊蠟塊并粘在大小適宜的硬木塊上,以便于固定在切片機上。 貼片:一手持毛筆,一手轉(zhuǎn)動切片機,切片的蠟片連成一長條蠟帶切下的蠟帶放在一干凈黑紙上,用小刀根據(jù)需要切成數(shù)段,分別貼在干凈載玻片上。在恒溫展片臺上展平、烘干。8 染色切片可用不同方法,使其干燥,然后進(jìn)行染色。因為每一張載片上粘貼的是蠟帶,因此必須先用二甲苯去除石蠟再用酒精去除二甲苯,再進(jìn)入水中,才能染色,染色的方法很多,要根據(jù)每張標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑,最常用的是蘇木精,伊紅染色蘇木精使細(xì)胞核是深紫色,伊紅使細(xì)胞質(zhì)顯粉紅色,以此顯示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小,位置,染色后再根據(jù)制片的基本原理,使帶水的載片經(jīng)歷脫水→透明步驟最后喲感樹膠封片基本步驟如下:二甲苯×2(脫蠟)→酒精+二甲苯(1:1)→100%酒精×2→90% 酒精→80%→70%→50%→30%→水→蘇木精染色(鏡檢)→水→50%→70%→90%→0.5%伊紅(95%酒精配制)→95%→100%×2→二甲苯:酒精(1:1)→二甲苯×2→樹膠封片 簡便方法:先將各種材料切成片,要薄,不要用力的用鑷子夾,放在載玻片上,在載玻片上滴一滴水,將薄片放入,如顏色十分淡,加碘酒染色,蓋上蓋玻片,用紙巾將水吸干,即可。[更多]
巖石為了要在偏光顯微鏡下觀察,首先必須夠「薄」,薄到光線可以穿透標(biāo)本,一般的標(biāo)準(zhǔn)薄片厚度為30 μm,相當(dāng)于0.003公分。由于光線透過礦物時的速度因種類的不同而異,因此,我們可以利用礦物本身的光學(xué)特性,作為礦物鑒定的一項重要依據(jù)。實驗室制作薄片除了靠靈巧的雙手外,還需要依賴精密的儀器作輔助,才能達(dá)到既快又好的效果。以下就介紹實驗室制作薄片的幾個步驟: 1. 切割:將野外所采集的巖石標(biāo)本,先選取新鮮未風(fēng)化部分,再用鉆石鋸片切成符合玻片的適當(dāng)大小。由于鉆石是目前硬度最高的物質(zhì),為了切出各種硬度不同的巖樣標(biāo)本,實驗室中鋸片和研磨用磨盤均鍍上鉆石。 2. 磨平:把切好的巖樣標(biāo)本與要膠著的玻片,分別以#600~#1000的碳化硅粉末(Siliconcarbide powder)研磨,使巖樣切面成為光滑之平面。檢查切面是否平整光滑,可將巖樣面向光源,觀察其反射是否良好來判斷?! ?. 上膠:將處理完成的巖樣以環(huán)氧基樹脂(Epoxy)粘著于毛玻璃上,注意上膠前需將接觸面以酒精清潔,且在上膠時巖樣與玻璃之間不能有氣泡產(chǎn)生,以免影響切片時的粘著強度。上膠后置于固定平臺(Bonding jig)上,并以50℃低溫烘烤約6~8小時,以便固結(jié)、硬化?! ?. 切片:待膠硬化后將標(biāo)本置于薄片切割機(Petro-thin)上切割并磨成100~150μm的厚度,因為切割機轉(zhuǎn)速過快,所以無法切磨成太薄的標(biāo)本?! ?. 研磨:以測微器定出標(biāo)本厚度,再把100~150μm厚之巖樣標(biāo)本利用真空原理固定在真空吸盤上,然后直接在薄片研磨盤(Lapping plate)上研磨至標(biāo)準(zhǔn)厚度30μm?! ?.拋光:標(biāo)本若要做微探成分分析,則需將薄片分別用0.3~0.05μm的鋁粉拋光液進(jìn)行拋光。由于巖石具剛性,所以上述制作過程是將標(biāo)本先固定在玻片上再切薄,此與生物切片先切薄后,再固定于玻片上的程序剛好相反。7.偏光顯微鏡觀察:將制作好的巖石切片放置于顯微鏡圓形載物臺上,用壓片簧將切片壓住,打開顯微鏡光源.調(diào)焦旋鈕調(diào)焦即可成像 [更多]